水中葉綠素濃度是浮游生物分布的指標(biāo)，是衡量水體初級生產(chǎn)力和富營養(yǎng)化作用的最基本的指標(biāo)。葉綠素分為葉綠素a和b，當(dāng)前研究更關(guān)注葉綠素a的濃度。浮游植物的大量生長是水體富營養(yǎng)化的主要現(xiàn)象，其中葉綠素a是所有浮游植物門類都含有的葉綠素類型，不僅作為水體營養(yǎng)狀態(tài)劃分的重要指標(biāo)，而且可用于表征浮游植物的現(xiàn)存量。因此，葉綠素a在水體富營養(yǎng)狀況評價(jià)中起關(guān)鍵性作用。

葉綠素a本身對環(huán)境沒有危害，但它是估算浮游植物生物量的重要指標(biāo)，可以通過測定水中浮游植物葉綠素a的含量，掌握水體的初級生產(chǎn)力情況和富營養(yǎng)化水平，在環(huán)境監(jiān)測中，葉綠素a含量是評價(jià)水體富營養(yǎng)化的指標(biāo)之一。國際上，經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（OECD）規(guī)定了關(guān)于評定湖泊營養(yǎng)狀態(tài)的葉綠素a劃分標(biāo)準(zhǔn)。我國原地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（GHZB1-1999）中規(guī)定了葉綠素a標(biāo)準(zhǔn)值，但是現(xiàn)行有效的地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（GB3838-2002）沒有葉綠素a的標(biāo)準(zhǔn)值。

水中葉綠素a的測定步驟具體是什么呢？

（1）提取試劑

除熱乙醇法，國內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)方法均采用90%丙酮作為提取試劑。EPA446.0指出，90%丙酮溶液可以有效提取大部分藻類細(xì)胞中的葉綠素a，而且不產(chǎn)生其他衍生物。丙酮是國際上較為公認(rèn)的提取葉綠素的試劑

（2）濾膜

除《水和廢水檢測分析方法（第四版）》采用乙酸纖維濾膜外，均采用玻璃纖維濾膜。

（3）樣品保存方法

樣品的保存條件各種方法略有不同，但水樣采集后均保證4℃冷藏保存，樣品濾膜可冷凍保存。而且葉綠素a測定樣品濾膜冷凍后再研磨，可提高提取效率。在《浮游植物中葉綠素a提取方法的比較與改進(jìn)》的研究結(jié)果。如采樣后不立刻測定，-18℃下冰凍，再于室溫條件下融解，利用細(xì)胞內(nèi)冰粒的形成和細(xì)胞液濃度的增高引起溶漲，使胞壁結(jié)構(gòu)破碎引起葉綠素溶出。

（4）是否研磨及研磨后是否需要浸泡

雖然研磨的方法較為費(fèi)力，但是該方法操作簡單，儀器設(shè)備要求低，常溫操作不會對葉綠素a造成破壞，細(xì)胞破碎完全，對葉綠素的提取速度快，效率高，并在環(huán)境監(jiān)測系統(tǒng)廣泛應(yīng)用，考慮到方法的經(jīng)典性和數(shù)據(jù)的可沿用性，新的技術(shù)線路中關(guān)于對葉綠素a的提取步驟沿用《水和廢水監(jiān)測分析方法（第四版）》中的研磨方法，研磨提取葉綠素a，主要通過機(jī)械作用破壞藻類的細(xì)胞壁和葉綠體使葉綠素a溶解于丙酮，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)。

（5）計(jì)算公式及波長

關(guān)于計(jì)算方法，主要有三色法和單色法，三色法主要考慮了葉綠素b和葉綠素c對測定的干擾，測定的是表觀葉綠素a的含量（包括葉綠素a與脫鎂葉綠素a之和），單色法考慮脫鎂葉綠素a的干擾。從方法的簡便性來說，三色法操作簡單，產(chǎn)生誤差幾率小，耗時(shí)比單色法短；目前《水和廢水監(jiān)測分析方法（第四版）》中測定葉綠素a的方法在地表水環(huán)境監(jiān)測中應(yīng)用最為廣泛，該方法采用丙酮研磨提取葉綠素a，用三色法計(jì)算葉綠素a的濃度。